9 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Естественным конечным продуктом пуринового метаболизма — сложного биохимического процесса, в котором принимают участие разнообразные энзимные системы, является мочевая кислота (2,6,8-триоксипурин). Основной формой существования мочевой кислоты в организме является мононатриевый урат, который преимущественно в этой форме практически полностью выводится с мочой. Повышенное содержание мочевой кислоты в крови (гиперурикемия) является одной из причин развития таких заболевания как уратный нефролитиаз, подагра, ишемическая болезнь сердца и др. Поэтому адекватная оценка состояния пуринового обмена является важным диагностическим тестом в клинической практике. Однако, интерпретация результатов биохимического лабораторного исследования мочевой кислоты в сыворотке крови в настоящее время не убедительна, так как в литературе нет единого мнения о нормальном содержании мочевой кислоты в крови с одной стороны. С другой стороны, известные величины нормальной концентрации мочевой кислоты в крови имеют большой вариационный диапазон (от ≈ 147 до ≈ 354 мкм/л), что не позволяет адекватно оценить уровень её содержания и выявить гиперурикемию у отдельно взятого пациента.

Была поставлена задача выявить и изучить зависимость содержания мочевой кислоты в сыворотке крови от массы тела. Масса тела каждого индивидуума — совокупность его социально-экономических, физиологических, биологических особенностей жизни и находится в прямой зависимости от процессов метаболизма в организме.

Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови определялось у практически здоровых людей во время проведения профилактических осмотров. Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови изучалось у мужчин в возрасте 34 — 37 лет, не имеющих острых или обострения хронических заболеваний на тот момент. В программе участвовало 530 человек. Было сформировано 6 групп по массе тела: до 60 кг, 61 — 70, 71 — 80, 81 — 90, 91 — 100, 101 — 120 кг. Мониторинг проводился строго в утренние часы, натощак. Содержание мочевой кислоты в плазме крови исследовали на автоматическом биохимическом анализаторе «Alcyon» с использованием стандартных наборов реактивов, массу тела определяли взвешиванием. Средние показатели концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови рассчитывали методами вариационной статистики с использованием компьютерной программы «Stat lend».

В результате исследований, впервые выявлена прямопропорциональная зависимость содержания мочевой кислоты и массы тела. При этом исключено влияние производственного и социального фактора. Нами установлено, что чем больше масса тела, тем выше нормальное содержание мочевой кислоты в крови. Результаты статистически достоверны. Коэффициент корреляции 0, 326; р

Читать еще:  Невропатия лицевого нерва и прозопарезы у детей

Мочевая кислота

Существующие методы определения концентрации мочевой кислоты можно разделить на несколько групп:

1. Колориметрические — все эти методы недостаточно специфичны и основаны на:

  • способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорновольфрамовую и мышьяковомолибденовую кислоты, железосинеродистый калий;
  • прямом фотометрическом определении концентрации мочевой кислоты по реакции Фолина‑Дениса;
  • исследовании содержания по фенолгипохлоритной реакции.

2. Энзиматические — определение концентрации мочевой кислоты по расщеплению ее уриказой до аллантоина, СО2 и Н2О2. Результаты реакции учитываются:

  • по количеству потребленного кислорода;
  • регистрацией величины снижения абсорбции мочевой кислоты при 293 нм;
  • определением образовавшейся перекиси водорода. Последняя при участии каталазы окисляет метанол до формальдегида, определяемого дополнительной реакцией;
  • по флуоресценции образовавшихся продуктов после добавления флюорофора;
  • с помощью потенциометрического электрода с иммобилизованной уриказой;
  • образовавшаяся перекись водорода в присутствии каталазы вступает в реакцию с этанолом, образуется ацетальдегид, который восстанавливается НАДН, что сопровождается уменьшением светопоглощения при 340 нм.

Унифицированным методом является фосфорновольфрамовый метод.

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Принцип

Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию в пробе мочевой кислоты.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод)дети0,12‑0,32 ммоль/л
мужчины0,24‑0,50 ммоль/л
женщины0,16‑0,44 ммоль/л
Моча (с использованием уриказы)1,48‑4,43 ммоль/сут
Желудочный сок47,6‑118,9 мкмоль/л
Слюнаоколо 0,088 мкмоль/л

Влияющие факторы

Пища, богатая пуринами; диуретики, салицилаты, кортикостероиды, лекарственные вещества — производные пурина, фенола, гемолиз.

Клинико‑диагностическое значение

Определение концентрации мочевой кислоты имеет особое значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры.

Сыворотка

В крови выделяют два типа повышения содержания мочевой кислоты (гиперурикемии): первичную и вторичную .

Первичная гиперурикемия отмечается в связи с подагрой, связанной с увеличением эндогенного синтеза мочевой кислоты в результате нарушения обмена нуклеопротеидов, снижением содержания в плазме уратсвязывающего белка и замедлением выведения уратов с мочой. Также выявляется при синдроме Леша‑Нихана, при котором метаболиты распада пуринов превращаются в мочевую кислоту, а не используются повторно для синтеза нуклеотидов.

Вторичная гиперурикемия сопровождает почечную недостаточность, выявляется при поликистозе почек, гематологических заболеваниях, при злокачественных заболеваниях (лейкоз, лимфома, миеломная болезнь и другие диссеминированные опухолях), при сердечно‑сосудистых заболеваниях (гипертония, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность), токсикозах беременности, синдроме Дауна, также встречается у больных эндокринными и обменными заболеваниями (диабет, гликогеноз I типа, гипо‑ и гиперпаратиреодизм, акромегалия, микседема), после применения лекарственных препаратов.

Читать еще:  Красный пупок у ребенка причины

Гипоурикемия отмечается при лимфогранулематозе, миеломной болезни, гепатоцеребральной дистрофии (синдром Вильсона‑Коновалова), ксантинурии.

Увеличение содержания мочевой кислоты выявляется при подагре, лейкозах, вирусном гепатите, серповидноклеточной анемии, болезнь Вильсона‑Коновалова.

Снижение — при ксантурии, дефиците фолиевой кислоты, свинцовой интоксикации.

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Метод Мюллера-Зейферта основан на способности мочевой кислоты взаимодействовать с фосфорно-вольфрамовым реактивом с образованием соединения, окрашенного в синий цвет. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству мочевой кислоты. По показаниям ФЭКа и по формуле рассчитывают содержание мочевой кислоты:

Мг% = Ест , где Сст = 2 мг%

клинико-диагностическое значение: Гиперурикемия является основным симптомом подагры, а также наблюдается при синдроме Леша-Нихана – врожденном дефиците фермента гуанингипоксантинфосфорибозилтрансферазы. Подъем мочевой кислоты может быть следствием усиленного распада тканевых нуклеотидов (патологическое изменение крови, миелоз). Это явление носит название «вторичной» подагры. Некоторое нарастание мочевой кислоты наблюдается при диете, богатой пуринами. Снижение мочевой кислоты наблюдается при акромегалии, болезни Коновалова-Вильсона, ксантинурии.

Пожилой больной с резко выраженным сахарным диабетом внезапно потерял сознание (диабетическая кома). Может ли врач установить характер этой комы без лабораторного подтверждения?

При сахарном диабете наблюдается кетонемия (повышение кетоновых тел в крови). Одним из кетоновых тел является ацетон. От таких пациентов пахнет ацетоном.

Билет 3

1)Струк.орг-ия белк.молекул…

Первичная структура белка — последовательность аминокислот в полипептидной цепи (ППЦ). Пептидная связь формируется только за счет альфа-аминогруппы и альфа-карбоксильной группы аминокислот. Вторичная структура — это пространственная организация стержня полипептидной цепи в виде α-спирали или β-складчатой структуры. В α-спирали на 10 витков приходится 36 аминокислотных остатков. Фиксируется α-спираль с помощью водородных связей между NH-группами одного витка спирали и С=О группами соседнего витка. β-Складчатая структура удерживается также водородными связями между С=О и NH-группами. Третичная структура — трехмерное взаимное расположение в пространстве спиралеобразных и складчатых участков полипептидной цепи. В формировании третичной структуры участвуют прочные дисульфидные связи и все слабые типы связей (ионные, водородные, гидрофобные, Ван-дер-ваальсовые взаимодействия). Четвертичная структура – трехмерная организация в пространстве нескольких полипептидных цепей. Каждая цепь называется субъединицей (или протомером). Поэтому белки, обладающие четвертичной структурой, называют полигомерными белками.

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Нормальное содержание от 2,35 до 5,9 ммоль/сут. Содержание мочевой кислоты увеличивается при состояниях, сопровождающихся повышенным образованием пуринов, распадом тканей (лейкозы, распадающиеся опухоли, разрешающаяся пневмония), а также при приеме пищи, богатой пуринами.

Читать еще:  Какие продукты полезны для мужской потенции

Принцип метода основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовую кислоту с образованием окрашенного в синий цвет соединения. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.

Реактивы : 1) 10% раствор вольфрамата натрия: 11,2 г Na2WO4 × 2Н2O растворяют в 88,8 г дистиллированной воды; 2) 0,35 М раствор серной кислоты: к 200 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл H2SO4 с относительной плотностью 1,84 и доводят объем до 500 мл; 3) насыщенный раствор карбоната натрия (Na2CO3); 4) 50% раствор мочевины [CO(NH2)2]: 50 г мочевины растворяют в 50 мл дистиллированной воды; 5) фосфорно-вольфрамовый реактив: 50 г Na2WO4, 10 г Na2HPO4, 150 мл дистиллированной воды, 12,5 мл концентрированной серной кислоты (d = 1,84), растворенной в 50 мл Н2O; кипятят в колбе с обратным холодильником в течение часа, затем дистиллированной водой доводят объем до 500 мл.

Ход определения . В пробирку вносят 0,1мл только что выпущенной мочи и 0,99 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают. В центрифужную пробирку вносят 0,5 мл разведенной мочи, 2,5 мл дистиллированной воды, 1 мл 10% раствора Na2WO4, 1 мл 0,35 М раствора серной кислоты. Содержимое проб тщательно перемешивают и через 10 мин центрифугируют. К 2,5 мл супернатанта прибавляют 0,75 мл насыщенного раствора Na2CO3, 0,75 мл 50% раствора мочевины и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива. Через 20 мин фотометрируют при длине волны 610 им (красный светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы, которую обрабатывают так же, как и опытную, но вместо супернатанта берут 2,5 мл воды.

Расчет производят по калибровочной кривой или по стандартному раствору мочевой кислоты, который обрабатывается как опытная проба.

Клиническое значение . Кристаллы мочевой кислоты обнаруживаются в моче при большой потере жидкости организмом: повышенное потоотделение, понос, рвота.

Лекарственные препараты, используемые для лечения лимфом, лейкозов, часто вызывают повышение уровня мочевой кислоты.

Высокая концентрация мочевой кислоты и низкое значение pH могут привести к образованию камней мочевой кислоты в мочевом тракте.

Пониженное содержание мочевой кислоты в моче обнаруживают при хроническом гломерулонефрите. Уменьшение выделения мочевой кислоты вызывает прием салицилатов, тиазидных диуретиков, хроническое потребление алкоголя.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector
×
×